推荐产品
技术资料/正文
彗星实验原理及注意事项
1090 人阅读发布时间:2021-01-06 09:58
体内碱性彗星试验原理及注意事项
体内碱性彗星试验在化合物遗传毒性评价中的应用日益广泛。ICH S2(R1)已将肝脏彗星试验列为第2个组织/终点的体内试验;体内哺乳动物碱性彗星试验的指导原则(TG489)也已颁布。体内碱性彗星实验能够检测DNA链断裂、碱性不稳定位点、不完整切除修复引起的DNA链的断裂,能够制成合适细胞悬液的组织DNA损伤。与其他试验相比其检测的是单细胞水平的DNA损伤,因此该试验敏感性较高,操作简单,经济省时。
实验原理
彗星实验(comet assay)也称单细胞凝胶电泳试验(single cell gel electrophoresis.SCGE),是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理(如辐射、重金属等)后,细胞中的DNA发生单链或双链断裂,经细胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在电场作用下,DNA 断片迁移出细胞核,形成彗星状的电泳图谱。正常细胞的大分子DNA在电场作用下迁移距离较短,DNA仍保留在细胞核的范围,形成圆形或轻微拖尾的图谱。根据电泳缓冲液的pH值不同,可分为中性彗星实验(pH=8.4)和碱性彗星实验(pH>13)。中性彗星实验主要用于检测DNA双链的断裂损伤,碱性彗星实验具有更高的灵敏性,可用于检测更少量的单链和双链断裂损伤。
需要注意的是,试验过程中的个方面,包括样品准备、电泳条件、视觉分析参数(如染色强度、显微镜光强度以及使用显微镜滤镜和相机动态和环境条件(如背景照明)已经被研究,可能影响DNA迁移。
北京汇智泰康针对碱性彗星试验开发彗星试验试剂盒,本试剂盒提供了彗星试验(单细胞凝胶电泳试验)需要的主要试剂盒耗材,省去了细胞裂解液、细胞悬液、碱性电泳液、电溶胶配制等时间,可以直接使用,大大缩短了实验周期;试剂盒各成分均经过严格的质量检测和多次试验验证,符合碱性彗星试验要求,实验结果准确、可靠、重现性高。
碱性彗星试剂盒应用广泛,可进行食品与饮用水、化学品、洗涤剂、消毒剂、食品添加剂、药物残留、化妆品、容器与包装材料等多个方面的遗传毒性检测评价。